Микроскопия мазка мокроты на туберкулез

Содержание
  1. Анализы на туберкулез
  2. Бактериоскопический метод
  3. Метод флотации
  4. Люминесцентная микроскопия
  5. Фазово-контрастная микроскопия
  6. Исследование смыва из бронхов
  7. Исследование мочи, кала, цереброспинальной и плевральной жидкости на МБТ
  8. Предварительная обработка биологического материала
  9. Биологический метод
  10. Ускоренные методы поиска микобактерий
  11. Молекулярно-генетические методы
  12. Микроскопи­ческое исследование мокроты
  13. Клетки и эластичные волокна в результатах анализа
  14. Спирали и кристаллы в микроскопических исследованиях
  15. Особенности анализа мокроты на туберкулез
  16. Общие сведения
  17. Алгоритм проведения анализа мокроты
  18. Общие правила сбора мокроты
  19. Методы исследований
  20. Техника безопасности
  21. Сколько стоит и срок
  22. Метод исследования мокроты на туберкулёз
  23. Общие сведенья о туберкулёзе
  24. Ценность лабораторной диагностики мокроты
  25. Сбор мокроты
  26. Что нужно знать при сборе мокроты?
  27. Методы диагностики
  28. Макроскопический анализ
  29. Микроскопический анализ
  30. Иммуноферментный анализ
  31. Автоматизированная система ВАСТЕС MGIT 960
  32. Флуоресцентная микроскопия
  33. Полимеразная цепная реакция
  34. Культивирование на средах
  35. Заключение

Анализы на туберкулез

Микроскопия мазка мокроты на туберкулез

Мокроты больного — это смесь секрета желез слизистой оболочки трахеи и бронхов, серозного выпота из патологически измененных сосудов, иногда частиц казеозных масс, некротической грануляционной и легочной ткани, а также примеси солей. Мокроты выделяется при многих заболеваниях легких и бронхов.

В туберкулезных учреждениях больные собирают мокроту в индивидуальные контейнеры, на четверть емкости заполнены раствором хлорамина, где оно частично дезинфицируется. Контейнеры градуированные, и это дает возможность определять суточное количество мокроты.

Макроскопически у больных туберкулезом легких мокрота имеет слизистый или слизисто-гнойный характер, без запаха, гомогенная, не образует слоев. Количество мокроты может быть разной. В начале заболевания туберкулезом легких мокрота не выделяется, затем оно может выделяться утром отдельными плевками, позже его количество может достигать 100-200 мл.

После макроскопического проводят бактериоскопическое, бактериологическое и биологическое исследование мокроты.

Бактериоскопический метод

Бактериоскопический метод охватывает прямую бактериоскопию мазков из патологического материала, окрашенных по Цилю-Нильсену, бактериоскопию методом флотации, люминесцентную микроскопию, фазовоконтрастного микроскопию.

Бактериоскопическое исследование мокроты начинается с приготовления мазка. Для этого мокроты смешивают с раствором натрия гидроксида и центрифугируют для получения осадка. Осадок стеклянными палочками переносят на предметное стекло.

Вторым предметным стеклом его равномерно размещают: накрывают покровным стеклом. Препарат изучают под микроскопом. В нем можно увидит лейкоциты, эластичные волокна, а при специальной окраске — атипичные клетки и различные бактерии.

Микобактерии окрашиваются по Граму положительно. Для выявления МБТ готовят мазок мокроты высушивают его, фиксируют над пламенем спиртовки, после чего окрашивают по Цилю-Нильсену. Окраска производится сначала карболовым раствором фуксина.

Микобактерии туберкулеза плохо воспринимают окраску, поэтому раствор фуксина наносят на препарат в большом количестве, подогревают над пламенем спиртовки до появления пара. Затем краску сливают, препарат промывают в воде и обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты или в смеси этилового спирта с раствором соляной кислоты.

При этом все бактерии и морфологические элементы мокроты, кроме микобактерий туберкулеза, бесцветные. Мазок промывают проточной водой, а затем наносят метиленовый синий на 1-2 мин. После этого раствор краски сливают, мазок промывают и высушивают.

Препарат изучают через иммерсионной систему микроскопа, для чего на препарат наносят каплю иммерсионного масла, чтоб создать одинаковую среду между линзой объектива и препаратом. Микобактерии туберкулеза под микроскопом видно окрашенными в красный цвет.

Метод окраски по Цилю-Нильсену позволяет выявить микобактерии туберкулеза в тех случаях, когда в 1см3 мокроты содержится около 5000 — 10000 МБТ при условии, если просмотрено 300 полей зрения. При небольшом количестве МБТ в мокроте бактериоскопический метод неэффективен.

Исследование мокроты следует проводить в течение трех дней подряд, а при отрицательном результате — применить метод флотации.

Метод флотации

Он основан на том, что при встряхивании двух жидкостей с различным удельным весом легче жидкость всплывает на поверхность одновременно с микобактериями туберкулеза, находящихся в суспензии.

Суть методики заключается в том, что готовят водную суспензию с углеводородами (ксилол, бензол) и МБТ. На поверхность воды утечет сливкообразная пена с МБТ, которую отсасывают пипеткой и наносят на предметное стекло.

Слой пены на предметном стекле высушивают и наносят новый слой пены из колбы. Так наслаивают пену 5-6 раз, после чего мазок фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену.

Люминесцентная микроскопия

Эффективным методом выявления микобактерий туберкулеза является люминесцентная микроскопия. Суть метода заключается в способности микобактерий туберкулеза, окрашенные специальными красителями (аурамин, родамин), светиться при облучении ультрафиолетовыми лучами.

Преимуществом метода люминесцентной микроскопии является возможность проведения исследований при меньших увеличениях микроскопа, обеспечивает просмотр в короткий срок большего количества полей зрения, чем при обычной микроскопии.

Возможность выявления микобактерий туберкулеза увеличивается на 10-15% по сравнению с обычной бактериоскопии и на 8% — по сравнению с методом флотации.

Используют люминесцентный микроскоп под малым увеличением. На темном фоне видны золотисто-желтые микобактерии туберкулеза.

Фазово-контрастная микроскопия

Это единственный микроскопический метод исследования, позволяющий наблюдать микобактерии и их биологически измененные формы в живом состоянии. Для проведения такого исследования применяют специальное фазовоконтрастное устройство.

При цитологическом исследовании мокроты у больных туберкулезом легких оказывается незначительное количество нейтрофилов в стадии значительной дегенерации на фоне казеозного детрита, скопления мононуклеаров, гигантских клеток Пирогова-Лангханса, иногда эозинофилы.

В случаях, когда мокроты нет или она выделяется в очень малом количестве, больному назначают отхаркивающее микстуру или раздражающие ингаляции. Кроме того, в случаях, когда нет мокроты, исследуют смыв из бронхов.

Исследование смыва из бронхов

Оно проводится врачом. Для этого больному натощак смазывают корень языка, заднюю стенку глотки и надгортанник 1% раствором дикаина. Затем гортанным шприцем вливают в трахею 5-10 мл изотонического раствора натрия хлорида.

У больного сразу возникает сильный кашель и введен изотонический раствор натрия хлорида выкашливается на чашку Петри. Также смыв из бронхов (БАС — бронхоальвеолярный смыв) получают с помощью БАЛ — бронхо-альвеолярного лаважа, который проводят при бронхоскопии. БАЗ исследуют методом флотации или методом посева.

Исследование смыва из бронхов позволяет дополнительно выявлять МБТ в 5-10% случаев.

Исследование мочи, кала, цереброспинальной и плевральной жидкости на МБТ

В клинической практике МБТ нередко приходится проявлять в моче, кале, цереброспинальной и плевральной жидкости. Исследование мочи на МБТ проводят в тех случаях, когда в ходе исследования осадка в каждом поле зрения оказывается не менее 15 лейкоцитов.

Для выявления МБТ мочу многократно центрифугируют, наслаивая каждый раз новые порции с осадка мочи на предметное стекло. Мазок окрашивают по методу Диля-Нильсена. Выявление микобактерий туберкулеза в моче свидетельствует о наличии туберкулеза почек.

Для исследования мочи по методу флотации дают ей постоять, затем 20-30 мл осадка обрабатывают, как обычно, без подогрева на водяной бане. Отсутствие МБТ в гнойной мочи и это не исключает наличия туберкулеза почек. В таких случаях нужно или делать ее посев на питательные среды, или применять биологический метод исследования.

Исследование кала на МБТ следует проводить в случаях подозрения на туберкулез кишок.

При этом надо помнить, что у больных, выделяющих МБТ и частично заглатывают мокроту, МБТ можно выявить при исследовании кала и за непораженных кишок, поскольку микобактерии туберкулеза устойчивы и не всегда погибают под воздействием пищеварительных соков. В кале больных туберкулезом кишок часто оказывается слизь, кровь и примеси гноя.

Обнаружение МБТ в цереброспинальной жидкости нередко имеет решающее значение в диагностике туберкулезного менингита. Однако бактериоскопическим методом выявить МБТ удается только в 10-20% больных туберкулезный менингит. Исследование проводится по следующей методике.

Пробирку с цереброспинальной жидкостью ставят на 8-10 часов в прохладном месте. Если в ней образуется нежная фибринная пленка (она состоит из клеток и МБТ), ее наносят на предметное стекло и готовят препарат по методу Циля-Нильсена.

В случаях, когда пленка не образуется, препарат готовят из осадка после центрифугирования.

Для выявления МБТ в плевральном экссудате, пунктатах и выделении из свищей готовят препарат так же, как и при исследовании мокроты.

Бактериологическое исследование состоит из посева материала на питательные среды и дифференциации культуры МБТ от кислотоустойчивых сапрофитов.

Этим методом можно обнаружить микобактерии туберкулеза, когда в 1 мл материала находится 20-100 микробных клеток. Пробирки со средой помещают в термостат при температуре 37 ° С.

Первые колонии микобактерий могут появиться на 18-30-й день, а иногда — через 2-3 месяца. Бактериологическое исследование проводят одновременно с бактериоскопическим трижды.

Посев исследуемого материала производится на специальные среды после предварительной обработки. Чаще всего используют такие среды: Левенштейна-Йенсена, Финна-2, Миддлбрука, Огава и др., которые содержат вещества, задерживающие рост посторонних микроорганизмов.

Предварительная обработка патологического материала заключается в уничтожении сопроводительной бактериальной флоры. Посев материала из бронхов, а также посев мочи делают из центрифугата или осадка. При этом мочу, если она не загрязнена, можно не обрабатывать.

Предварительная обработка биологического материала

Для подготовки к посеву мокроты, плеврального экссудата, цереброспинальной жидкости существует несколько методов предварительной обработки.

Метод Мазура заключается в обработке патологического материала 3-4 мл 2% раствором серной кислоты в стерильной пробирке. Пробирку встряхивают в течение 3 мин., после чего материал стерильной платиновой петлей наносят на яичные среды.

Метод Петрова: мокроты обрабатывается 4% раствором гидроксида натрия в течение 15 мин., А затем центрифугируется.

Биологический метод

Это привитие патологического материала животным. Гвинейским свинкам или белым мышам в паховой участок или в брюшную полость вводят исследуемый материал в дозе 2-3 мл. Для этого его сначала обрабатывают 3 8% раствором соляной кислоты, хорошо отмывают (иначе на месте введения может возникнуть некроз тканей, возможна даже смерть животного от воздействия кислоты).

Незагрязненную мочу и СМЖ можно прививать без предварительной обработки. При наличии в патологическом материале вирулентных штаммов МБТ ​​животного заболевают туберкулезом и погибают через 1-2 месяца после заражения. Если МБТ масс ослабленную вирулентность, животное погибает позже или может совсем не погибнуть.

В таких случаях животное забивают, и диагноз устанавливают после вскрытия, макро- и микроскопического выявления туберкулезных бугорков. Диагноз можно поставить на основании прижизненного исследования увеличенного регионариого лимфатического узла или инфильтрата, возникший на месте инокуляции патологического материала.

В последние годы для дифференциации микобактерий используют метод газожидкостной хроматографии, основанный на высокой способности различных соединений (аминокислот, нуклеиновых кислот, жиров, углеводов и т. д.). При этом не исключается этап культивирования возбудителя на питательных средах, что можно отнести к недостаткам метода.

Ускоренные методы поиска микобактерий

К ускоренным методам обнаружения микобактерий принадлежат выявления МБТ с помощью индикаторной пробирки ВВL МОИТ. Рост микобактерий туберкулеза происходит в течение 4-10 суток. Пробирки ВВL МОИТ содержат бульон и флуоресцентное соединение, реагирует на кислород, растворенный в бульоне.

Исходная концентрация кислорода не дает яркого свечения. При поглощении кислорода культурой МБТ наблюдается яркая флуоресценция на дне пробирки. Такой результат считают положительным. Если флуоресценции нет или она незначительна — результат отрицательный.

Показания пробирок учитывают ежедневно, начиная со второго дня инкубации.

В последнее время для диагностики туберкулеза используют иммуноферментные и молекулярно-генетические методы.

Молекулярно-генетические методы

Появились методы идентификации МБТ с помощью моноклональных антител, полученных способом гибридомной технологии. Сейчас существует более 100 моноклональных антител к эпитопам основных антигенов МБТ.

Применение этих антител в иммуноферментном анализе дает возможность очень быстро дифференцировать вид возбудителя, но пока метол используется в научных разработках для идентификации возбудителя туберкулеза, который чаще всего встречается.

Среди молекулярно-генетических методов диагностики туберкулеза чаще всего применяется метод ДНК-зондов и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В основе этих методов лежит принцип комплементарности нуклеотидных оснований в построении двуспиральной молекулы ДНК.

При проведении ДНК-зондирования в случае наличия в пробе исследуемого специфического участка ДНК микобактерий образуется гибрид (двухцепной фрагмент) ДНК исследуемого и ДНК-зонда.

В основе приципа ПЦР лежит многократное увеличение фрагмента ДНК.

Для амплификации (многократного удвоения гена бактерий) требуется наличие двух праймеров (затравок) — небольшого одноцепочечного фрагмента ДНК, что соединяется с комплементарной участком одной из цепей матричной ДНК.

В дальнейшем происходит достройка этой цепи ДНК-полимеразой. Увеличение количества (в 106 раз) фрагмента амплифицируемого оказывается электрофорезом в агаровом геле. Учет результатов реакций осуществляется под пластинами трансиллюминатора в ультрафиолетовом свете,

ДНК-зондирование позволяет проводить определение микобактерий в диагностическом материале в течение 2-4 суток, а ПЦР — за 4-6 ч. с максимально высокой чувствительностью методов — 10-100-1000 клеток в пробе исследуемого.

Источник: https://www.eurolab.ua/encyclopedia/323/48749/

Микроскопи­ческое исследование мокроты

Микроскопия мазка мокроты на туберкулез

В случаях патологических поражений ткани легких, бронхиального дерева или трахеи образуется секрет под названием мокрота. Выделение мокроты сопровождает массу патологий как дыхательной системы человека, так и сердечно-сосудистой.

Микроскопическое исследование мокроты, а точнее ее фиксированных окрашенных и нативных препаратов, свидетельствует о клеточном составе данного секрета.

Клеточный состав, в свою очередь, выступает отражением характера патологических процессов легких и бронхов, его активности, а также помогает различать кристаллические и волокнистые образования в секрете (важно при диагностике различных заболеваний), оценивать бактериоскопические показатели (состояние микрофлоры) в органах дыхания.

Клетки и эластичные волокна в результатах анализа

В качестве основы для микроскопических исследований выступают окрашенные и нативные препараты мокроты. Если требуется выявить микрофлору, то мазки мокроты окрашивают по Граму, Романовскому-Гимзе, а при необходимости выявления туберкулеза их окрашивают по Цилю-Нильсену.

При возникновении пневмонии в исследуемой мокроте могут наблюдаться клетки эпителия, лейкоциты, эритроциты и альвеолярные макрофаги.

Эпителиальные клетки в большом количестве указывают на плохой и некачественный образец секрета, который взяли на исследование.

Дело в том, что при превышении показателя 10 эпителиальных клеток в поле зрения при микроскопическом осмотре, лаборанты делают вывод о преобладании в аналитических данных образцов из носоглотки, полости рта, которые не имеют диагностического значения. Проще говоря, лаборатория получила на анализ не мокроту, а слюну пациента.

Ретикулогистиоцитарные клетки крупного размера с эксцентрическим ядром и многочисленными цитоплазменными включениями, незначительно присутствующие в мокроте, носят название альвеолярных макрофагов.

Включения в цитоплазме, содержащиеся в них, могут иметь в своем составе пылевые клетки, лейкоциты и прочее.

При наличии воспалительного процесса в дыхательных путях и легочной паренхиме, в частности, при пневмонии, в мокроте увеличивается число альвеолярных макрофагов.

Цилиндрический мерцательный эпителий располагается в организме в области слизистых гортани, бронхов и трахеи. Это удлиненные клетки с расширением одного конца с ядром и ресничками.

Клетки мерцательного эпителия присутствуют в любой мокроте, но если их количество превышает допустимый максимум, это может говорить об остром бронхите, трахеите, ларингите, бронхоэктазах и прочих повреждениях слизистой оболочки трахеи и бронхов.

В количестве 2-5 лейкоцитов в поле зрения при микроскопическом исследовании нет ничего необычного. Такая их концентрация присутствует абсолютно в каждом секрете.

Однако значительное увеличение их количества свидетельствует о воспалительных процессах в тканях легких, слизистых оболочках трахеи и бронхов.

Если окрашивать препараты мокроты по Романовскому-Гимзе, то становится возможным дифференцировать лейкоциты, что в некоторых случаях играет решающую роль в диагностике болезней.

Общее увеличенное количество нейтрофильных лейкоцитов и их количество в дегенеративной форме с фрагментами ядер и разрушенной цитоплазмой может свидетельствовать о воспалении слизистой бронхов или легочной ткани. Большая концентрация дегенеративных лейкоцитов всегда свидетельствует об активности воспаления и тяжелом прогнозе в течение болезни.

В любой мокроте обычно присутствуют единичные эритроциты, однако если их количество слишком завышено в показателях микроскопического исследования, это говорит о нарушениях сосудистой проницаемости у страдающих пневмонией, о процессе разрушения легочной либо бронхиальной ткани, о наличие застоя в малом круге кровообращения, о легочном инфаркте. При кровохарканье любого происхождения в мокроте всегда присутствуют эритроциты.

При различной деструкции ткани легких в результате абсцессов, туберкулеза, распадающегося рака легкого в мокроте специалисты обнаруживают пластические волокна в форме двухконтурных тонких и витых нитей с присущим только им дихотомическим разделением на концах.

При пневмонии возникновение в мокроте таких волокон говорит о начинающемся осложнении – абсцессе легочной ткани. При этом эластичные волокна могут возникать на старте осложнения еще до его рентгенологической визуализации.

Часто при возникновении туберкулеза, актиномикоза, пневмонии, обструктивного бронхита в мокроте начинают отделяться тончайшие волокна фибрина.

Коралловидные волокна характеризуют возникновение кавернозного туберкулеза, обезыствленные эластичные волокна (с солями кальция) – распад петрификата при туберкулезе. Итак, при стремительном воспалительном процессе в легочной ткани в анализах мокроты специалисты видят:

  • слизисто-гнойный либо гнойный характер исследуемой мокроты;
  • увеличенное число нейтрофилов в биоматериале, а также их дегенеративных форм;
  • увеличенное число альвеолярных макрофагов в материале исследования;
  • возникновение эластичных волокон, которое сигнализирует о процессе деструкции ткани легкого.

Спирали и кристаллы в микроскопических исследованиях

Также при микроскопическом исследовании мокроты лаборанты могут визуализировать спирали или кристаллы. Так, спирали Куршмана возникают в ходе спастического бронхиального состояния и возникновения сгустков слизи в бронхах.

При кашле слизь выкидывается в более крупный бронхиальный просвет, при этом она обретает форму спирали. Такое явление наблюдается при астме, легочных опухолях, бронхитах. А кристаллы Шарко-Лейдена представляют собой продукты распадающихся эозинофилов и выявляются в мокроте при астме, аллергии, легочной двуустке, наличии эозинофильных инфильтратов.

Также возможно возникновение в мокроте кристаллов ХС, если пациент страдает абсцессом, легочными новообразованиями, эхинококкозом легких, кристаллов гематоидина при гангрене легкого или абсцессе.

Среди прочих выявляемых элементов стоит назвать друзы актиномицета в ходе легочного актиномикоза, частицы эхинококка при легочном эхинококкозе, желтовато-серые пробки Дитриха с неприятным ароматом при легочном абсцессе и бронхоэктатическом заболевании, тетраду Эрлиха (обезыствленные детрит и эластичные волокна, кристаллы ХС и микобактерии туберкулеза) в результате возникновения первичных туберкулезных очагов, мицелий в ходе грибковых легочных инфекций, а также пневмоцист, сферул грибов, личинок аскарид, кишечной угрицы и яиц легочной двуустки.

Важно знать, что бронхиальная астма отличается от всех других заболеваний легочной системы отделением небольшой порции очень вязкой мокроты.

В ходе микроскопического наблюдения хорошо визуализируются спирали Куршмана, эозинофилы, цилиндрический эпителий и кристаллы Шарко-Лейдена.

При нормальном состоянии человека и отсутствии астмы все вышеперечисленные составляющие в мокроте присутствовать не могут.

Современная медицина постоянно внедряет новейшие методики диагностирования тех или иных заболеваний, чтобы постановка диагноза, а также правильный ход лечения, происходили в как можно более быстром темпе, не допуская при этом осложнений.

Микроскопическое исследование мокроты способствуют определению всех известных современных микроорганизмов, которые могут поражать легочную и бронхиальную область, а также провоцировать всплеск различных заболеваний, начиная от онкологических опухолей, и заканчивая туберкулезом.

Данный анализ помогает специалистам, сопоставляя результаты различных обследований и анализов с высокой точностью определять возникновение той или иной патологии у пациента и быстро начинать принимать меры по ликвидации данных процессов.

Источники

  1. Лабораторные и инструментальные исследования в диагностике: Справочник / Пер. с англ. В. Ю. Халатова; под. ред. В. Н. Титова. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004 г. – 960 с.

Извозчикова Нина Владиславовна

Специальность: инфекционист, гастроэнтеролог, пульмонолог.

Общий стаж: 35 лет.

Образование: 1975-1982, 1ММИ, сан-гиг, высшая квалификация, врач-инфекционист.

Ученая степень: врач высшей категории, кандидат медицинских наук.

Повышение квалификации:

  1. Инфекционные болезни.
  2. Паразитарные заболевания.
  3. Неотложные состояния.
  4. ВИЧ.

Источник: https://FoodandHealth.ru/meduslugi/mikroskopicheskoe-issledovanie-mokroty/

Особенности анализа мокроты на туберкулез

Микроскопия мазка мокроты на туберкулез

16.07.2017

Для выявления заболевания на начальной стадии нужно сдать анализ мокроты на туберкулез (проводят микроскопию и бак посев мазка).

Мокроты – это слизистые соединения, находящиеся в бронхах и легких. При нормальном состоянии здоровья эти соединения вообще не образовываются. А при ослабленном иммунитете или других сопутствующих факторах резко увеличивается выработка подобного секрета в бронхах.

И это способствует быстрому попаданию туберкулезных бацилл в мокроту с последующим инфицированием организма. Если кашель продолжается более 1 месяца нужно обязательно сделать флюорографию.

Если на снимке будет обнаружено уплотнение в диаметре больше 1 см, человека в обязательном порядке направят на анализ мокроты на туберкулез.

Как происходит кровохарканье

Общие сведения

Если человек заражен палочкой Коха, то обязательно будет выходить мокрота, хоть и в небольших количествах. По цвету она имеет гнойно-слизистый оттенок с мелкими кровянистыми вкраплениями.

Наличие крови характерно для запущенной стадии туберкулеза (кавернозной). На начальных этапах заражения, кровь практически не наблюдается. Общий анализ мокроты на более запущенных стадиях дополнительно может показать кристаллы и эластичные волокна. Помимо того повышен уровень белковых соединений и присутствуют туберкулезные бациллы.

Сдают анализ мокроты при помощи бактериологического мазка (проводят микроскопию мазка, в затем его посев), который рассматривается в дальнейшем, под микроскопом.

Если результат отрицательный, то обязательно нужно пройти повторный анализ на предмет наличия туберкулезных бацилл и соединений. Повторный тест сдается не раньше чем через 1 месяц.

Как выглядит палочка Коха под микроскопом

Алгоритм проведения анализа мокроты

  1. После забора биоматериала, подготавливают специальное средство, которое поможет рассмотреть бактериологические соединения под микроскопом.
  2. Далее, между двумя лабораторными зеркалами растирают мокроту, устанавливают над горелкой.
  3. Для правильного исследования биологического материала на предмет наличия туберкулезных возбудителей, его необходимо окрасить специальным средством по методу Гросса или Циля-Нильсона.
  4. Анализ мокроты на микобактерии туберкулеза, при первом исследовании показывает уровень чувствительности около 80%.

    При каждом последующем чувствительность увеличивается вплоть до 98%.

  5. Бак посев мокроты не должен происходить позднее, чем через 2 часа после сбора.
  6. После выявления микобактерий, определяется чувствительность к тем или иным антибиотикам.

  7. Концентрация туберкулезных бацилл, превышающая 100 на 1 мл говорит об очень тяжелой форме болезни.

Туберкулезные микобактерии (под микроскопом)

Тест нужно сдавать не менее 3 раз, так как с каждым новым забором результат  точнее. Если после первого анализа он будет отрицательным — то это не говорит об отсутствии болезни.

Для окончательного вердикта нужно минимум 3 раза получить отрицательный результат. Кроме того, он может говорить о самой ранней стадии развития заболевания, при которой еще невозможно выявить туберкулезную палочку.

Общие правила сбора мокроты

Если вы задумываетесь на вопросом: Как сдавать анализ на туберкулез, то следующие рекомендации помогут:

  • Перед сбором мокроты врач выдаст специальную емкость в которую нужно собрать материал;
  • Очистить ротовую полость от остатков пищи – обязательно прополоскать рот и почистить зубы;
  • Перед сбором набрать в легкие как можно больше воздуха и прокашляться;
  • После кашля сплюнуть материал в емкость и плотно закрыть крышкой;
  • Не допустить попадание в контейнер слюны, нужна именно мокрота из легких;
  • Если не удается с кашлем добыть мокроту, то нужно постучать кулаком по грудной клетке или подышать над горячим паром, после повторить процедуру;
  • Если повторно не получится собрать секрет, то пациенту назначают Бромгексин или Амброксол.

Методы исследований

Всего существует 2 метода диагностики мокроты при туберкулезе: бактериологический и микроскопический. В обоих случаях расшифровка будет в виде КУБ+ или КУБ-. Исследования мокроты на туберкулез заканчиваются определением в составе патогенных микобактерий или их полным отсутствием.

  1. При отрицательном КУБ возможность инфицирования туберкулезом исключена, а затяжной кашель может указывать на другую легочную инфекцию.
  2. При наличии КУБ+ проводится дополнительно иммуноферментную диагностику. ИФА относится тоже к лабораторным методикам при туберкулезе легких. С его помощью можно поставить более точный диагноз.

Алгоритм проведения ИФА следующий:

  • Мокроту разбавляют в специальном растворе и добавляют специфические антитела;
  • После соединения этих компонентов, определяют сколько находится антигенных соединений в бактериологической среде.
  • По итогу этих данных определяют в сколько раз превышена концентрация микобактерий в 1 мл. исследуемой жидкости. На основании результата ставят диагноз и разрабатывают схему дальнейшего лечения.

При бактериальном методе собранный материал помещают в специальную среду, которая способствует выращиванию микобактерий. Через 10-20 дней проводят исследования на предмет наличия туберкулезных соединений и их концентрации.

Сдавать анализы по этому методу довольно-таки долго, так как нужно время для культивации в лабораторных условиях патогенных бактерий. В отдельных случаях сроки выполнения могут превышать 1 месяц.

Из-за этого такой способ потерял свою популярность среди пациентов.

Техника безопасности

Статья носит исключительно информационный характер и не является прямым руководством к действию. Прежде чем самостоятельно назначать себе какие-то анализы необходимо обязательно проконсультироваться с врачом и следовать его инструкциям.

Сколько стоит и срок

Цена диагностических анализов непосредственно зависит от лаборатории в которой будут проводиться исследования и местоположения. Например, по стоимости услуги в Москве будут стоить дороже, чем в Самаре и наоборот. Для получения необходимой информации нужно позвонить в регистратуру лабораторного учреждения и уточнить там. Обычно стоимость не превышает 400 рублей.

Срок выполнения анализа довольно краткий, хватит всего 2 рабочих дня, чтобы подготовить все результаты.

Анализ мокроты Ссылка на основную публикацию

Источник: http://tbdoc.ru/analysis/mokroty.html

Метод исследования мокроты на туберкулёз

Микроскопия мазка мокроты на туберкулез

Палочки размножаются в лёгких, образуют там колонии, выделяются при кашле, именно поэтому исследование мокроты – важный диагностический этап.

Лабораторная диагностика делается в основном микроскопическим, микробиологическим методом, бактерии культивируют на плотных средах Левенштейна-Йенсена или Финна-II, окрашивание выполняют по Цилю-Нильсену.

Есть и другие технологии, но все они не идеальны, имеют свои преимущества и недостатки.

Общие сведенья о туберкулёзе

Туберкулёз легких называют ещё чахоткой, что является устаревшим названием. Возбудитель – различные представители вида Mycobacterium tuberculosis complex, которых ещё называют палочками Коха (в честь первооткрывателя).

Бактерии туберкулёза поражают в основном лёгкие, где образуют многочисленные колонии. Именно поэтому можно исследовать мокроту на наличие возбудителя.

Также они формируют туберкулы – полые узелки из соединительной ткани, внутри которых находится гной и масса бактерий.

Ценность лабораторной диагностики мокроты

Лабораторное исследование мокроты довольно редко проводится для обнаружения людей, заражённых туберкулёзом. Чаще применяется для подтверждения диагноза, анализа состояния пациента, подстройки лечения, дозировки при химиотерапии, контроля результатов терапии. То есть оценка мокроты является постоянным необходимым способом исследования.

К лабораторной диагностике относится множество методов:

  • макроскопия;
  • микроскопия;
  • иммуноферментный анализ;
  • флуоресцентная микроскопия;
  • полимеразная цепная реакция;
  • культивирование.

Показанием к исследованию мокроты лабораторными методами являются признаки туберкулёза:

  • гипертермия;
  • длительный продуктивный кашель;
  • затемнения на флюорографии.

К достоинствам технологии относят следующие факты:

  • результат можно получить достаточно быстро при ПЦР и микроскопии;
  • установить точный штамм бактерии;
  • проконтролировать влияние химиотерапии или антибиотиков.

Минусы анализа мокроты следующие:

  • при скрытой форме туберкулёза бактерии не выделяются при кашле, из-за чего результат лабораторной диагностики будет отрицательным;
  • мокроту довольно трудно собрать, для этого нужна специальная герметичная ёмкость;
  • некоторые методы (культивирование) довольно длительные – более месяца.

Сбор мокроты

Можно брать экссудат следующего рода:

  • материал после ингаляции небулайзером;
  • промыванием бронхов специальными растворами;
  • мокрота из альвеол;
  • получение слизи при бронхоскопии;
  • взятие биоптата их трахеи, бронхов или плевры;
  • мокрота из бронхов;
  • мазки с гортани.

Мокроту собирают в плотно закрывающиеся стерильные и герметичные ёмкости. Это нужно для снижения вероятности занесения микробов в окружающий мир.

Ёмкости должны соответствовать следующим требованиям:

  • делаться из ударопрочного материала;
  • иметь хорошую прозрачность для возможности визуальной оценки качества и количества мокроты;
  • расплавляться при температуре 40-45 градусов;
  • иметь объём не меньше 40-50 мл;
  • отверстие должно быть шире 3 см.

Результативность и достоверность исследования мокроты зависит от правильности её сбора, соблюдения рекомендаций, которые должны минимизировать вероятность загрязнения материала. Кроме того, откашливание производится в герметичной комнате, так как данная процедура опасна для всех окружающих.

Что нужно знать при сборе мокроты?

При сборе материала нужно соблюдать ряд правил:

  • откашливание мокроты во флакон делается до начала химиотерапии;
  • также его проводят обязательно с утра, до завтрака и приёма препаратов;
  • при исследовании берут 3 пробы (каждый раз откашливая в новую ёмкость) в течение 3 суток подряд;
  • материал сразу же отвозят в лабораторию (в течение часа). В идеале она должна находиться в одном здании с туберкулёзным стационаром;
  • при невозможности это сделать пробу ставят в холодильник при +4оС, но держать там можно не более 2 суток;
  • крайне важно следить за целостностью ёмкостей. Нарушение герметичности приводит не только к порче пробы, но и к опасному заражению окружающей среды;
  • объём одной пробы должен составлять 3-5 мл;
  • медицинский работник обязательно одевает халат, шапку, медицинскую маску, резиновые перчатки и специальный фартук;
  • больному нужно откашливать не слюну или слизь из носа и глотки, а именно мокроту из нижних отделов бронхов. Для создания продуктивного кашля можно сделать 2-3 глубоких вдоха;
  • перед откашливанием рот тщательно промывают водой, чтобы удалить естественную микрофлору и кусочки пищи;
  • ёмкость держат у самых губ, после откашливания мокроту сразу сплёвывают;
  • медицинский работник стоит сзади больного, чтобы мокрота не попала на него. Его задача – контролировать правильность сбора материала;
  • после сбора слизи флаконы сразу герметично запечатывают;
  • если больному трудно откашливать мокроту, то накануне вечером, а также рано утром перед сбором слизи пациенту даёт отхаркивающие препараты.

Режим сбора материала для лабораторного анализа на туберкулёз легких зависит от стадии развития и лечения заболевания:

  1. При первом поступлении в течение 3 суток делают по 3 пробы ежедневно.
  2. Во время лечения ежемесячно собирают 3 пробы за раз.
  3. На долечивании каждые 2-3 месяца берут 2 пробы мокроты.

Методы диагностики

Исследование мокроты делается множеством способов. У каждого метода есть свои преимущества и недостатки, выбор технологии диагностики зависит от решения врача и оснащения больницы.

Макроскопический анализ

Характер мокроты зависит от стадии туберкулёза лёгких:

  1. При инфицировании на латентной стадии мокроты может не быть, или она имеется, но в минимальном количестве и обладает белым цветом или прозрачностью.
  2. При развитии клинической стадии мокрота приобретает выраженный гнойный характер, оттенок меняется на серый, жёлтый или зелёный, появляется неприятный запах.
  3. На более поздних стадиях, при появлении рецидивов в мокроте обнаруживаются прожилки крови.

Микроскопический анализ

Наиболее быстрый, простой и дешёвый способ оценки материала на туберкулёз легких. За счёт этого может применяться для постановки диагноза, однако он не имеет достаточно высокой надёжности, поэтому его сочетают с флюорографией. Используется для оценки состояния больного в процессе лечения.

Применяется 2 метода:

  1. Прямая микроскопия. Материал готовится непосредственно из мокроты.
  2. Микроскопия осадка. Материал концентрируется с помощью центрифугирования.

Для 50% достоверности метода нужно минимум 5000 бактерий на мл мокроты.

Для увеличения надёжности способа исследуют минимум 3 пробы материала. Получение отрицательного результата не означает отсутствие туберкулёза, так как мокрота может содержать очень малое количество возбудителей из-за закрытой формы.

Окраска делается по Цилю-Нельсену:

  1. В материал вносится карболовый фуксин при повышенной температуре и протравливании фенолом, который проникает во все бактерии препарата.
  2. Препарат обесцвечивается 25% серной кислотой и 3% солянокислым спиртом. Из-за восково-липидной мембраны палочки Коха не подвергаются воздействию кислот, поэтому они сохраняют окраску.
  3. Остальные микробы подкрашиваются 0,3% метиленовой синью. Бактерии туберкулёза не восприимчивы к анилиновым краскам, из-за этого цвет у них не меняется.

В итоге палочки Коха приобретают красный цвет, а все остальные клетки – синий. Препарат надо рассматривать через световой бинокулярный иммерсионный микроскоп с тысячекратным увеличением. Для постановки диагноза обычно хватает 100 полей зрения. При отсутствии бактерий рекомендуется просмотреть ещё 200 полей.

Иммуноферментный анализ

Метод основан на реакции антигена и антитела. Антитела – специфические иммуноглобулины, которые образуются в ответ на проникновение бактерий и вирусов. Антиген – протеины, вызывающие выработку иммуноглобулинов.

Проводится в 2 этапа:

  1. Берётся антитело, меченное каким-либо веществом. Оно добавляется в материал, где присутствует антитело. В ходе реакции образуется единый комплекс.
  2. Добавляется фермент, который меняет цвет меченных комплексов антиген-антитело. Интенсивность окраски материала указывает на количество иммуноглобулинов.

Автоматизированная система ВАСТЕС MGIT 960

ВАСТЕС MGIT960 – автоматизированный прибор на 960 проб, который самостоятельно проводит исследование материала. Суть метода состоит в следующем:

  1. В ёмкость вносится флюоресцирующий материал, флуоресцентные свойства которого блокируются с помощью кислорода.
  2. Бактерии при своей жизнедеятельности поглощают кислород, уменьшают его количество.
  3. Из-за снижения концентрации усиливаются флуоресцентные свойства материала. Оно регистрируется в автоматическом режиме.

Первые результата регистрируются на 4-5 день, а для достижения максимума нужно 11 суток.

Рекомендуем прочитать! Перейдите по ссылке:  Исследование мочи на туберкулёз

Флуоресцентная микроскопия

Люминесценция позволяет поднять результативность исследования на 10-15%, а требуемое время на это снизить в 2-3 раза. Применяют флуоресцентные краски: аурамин и родамин.

Их действие связано со способностью вступать в реакцию с воскоподобными веществами бактериальной мембраны возбудителя.

При облучении ультрафиолетом окрашенные таким способом палочки Коха начинают светиться оранжевым или красным цветом, при том, что остальной материал имеет чёрный или тёмно-зелёный оттенок.

Важно! Недостатком является сравнительно высокая стоимость метода.

Из-за того, что бактерии в препарате становятся очень яркими и контрастными, то можно уменьшить расширение микроскопа в 4-10 раз, сократив тем самым необходимое время на исследование материала. К тому же флуоресцентная окраска при соотнесении с окрашиванием по Цилю-Нельсену может дать информацию, сколько бактерий потеряло кислотоустойчивые свойства вследствие химиотерапии.

Полимеразная цепная реакция

Метод основан на увеличении количества ДНК возбудителя в материале в 100-110 раз за счёт специальных ферментов. Данный способ применим лишь для тех микробов, у которых точно установлен состав нуклеотидной последовательности. В отличие от копирования ДНК в результате деления клеток при ПЦР создаются лишь обрывчатые короткие участки ДНК.

Метод имеет множество преимуществ:

  • для положительного результата достаточно 10-100 бактерий в пробе;
  • абсолютная специфичность, так как метод применяется для конкретной ДНК;
  • результат становится известным через 4-5 часов.

Тем не менее, из-за высокой чувствительности метода возможны ложноположительные результаты, что является существенным минусом. Диагностика проводится с помощью амплификатора – специального прибора, в котором проходит реакция. Он создаёт условия для ПЦР и может использоваться для хранения препарата.

Культивирование на средах

Для культивирования рекомендуется плотная среда. На западе используется состав Левенштейна-Йенсена, который даёт колонии через 15-25 суток.

В России применяют среду Финна-II, которая уменьшает срок получения результата на 2-3 дня и увеличивает вероятность появления колонии на 6-8%. Однако при любой среде рекомендуется посев минимум 2-3 материалов.

Связано это с тем, что даже при нескольких пробах нет точной гарантии достоверности результата. Установлено, что при 6 посевах вероятность обнаружения туберкулёза увеличивается на 7-8%.

Заключение

Исследование мокроты при лечении туберкулёза – обязательное условие для контроля состояния пациента.

Сбор слизи должен соответствовать всем требованиям, иначе будет портиться материал, появиться опасность заражения. Анализ можно проводить разными методами, каждый из которых имеет свои плюсы и минусы.

При исследовании желательно сочетать сразу несколько технологий, чтобы повысить достоверность.

Источник: https://ChahotkiNet.ru/diagnostika/analizy/metod-issledovaniya-mokroty

Хороший врач
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: